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高效液相色譜柱選擇指南㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，怎么選擇高效液相色譜柱✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，在高效液相色譜中ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，分離效果好壞的一個重要指針是色譜填料的選擇.

高效液相色譜柱選擇指南✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴，怎么選擇高效液相色譜柱♀☿☼☀☁☂☄，在高效液相色譜中✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，分離效果好壞的一個重要指針是色譜填料的選擇♀☿☼☀☁☂☄。以下填料為詳情：

一✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥、聚合物填料

聚合物填料多為聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙烯酸脂等⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，其重要優點是在PH值為1-14均可使用⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺。

相對于硅膠基質的C18填料ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ，這類填料具有更強的疏水性⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯；大孔的聚合物對蛋白質等樣品的分離非常有效⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺。

現有的聚合特填料的缺點是相對硅膠基質填料㈠㈡㈢㈣㈤㈥㈦，色譜柱柱效較低♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃。

二♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃、硅膠基質填料

aⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ、正相色譜

正相色譜用的固定相通常為硅膠（Silica）以及其它具有極性官能團♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃，如胺基和氰基的鍵合相填料✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴。

由于硅膠表面的硅羥基或其它極性基團極性較強⓱⓲⓳⓴⓵⓶⓷⓸⓹⓺⓻⓼⓽⓾，因此㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，分離的次序是依據樣品中各組分的極性大小①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯，即極性較弱的組份最先被沖洗出色譜柱ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ。

正相色譜使用的流動相極性相對比固定相低㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，如正己烷☈⊙☉℃℉❅，氯仿①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯，二氯甲烷等❣❦❧♡۵。

bⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ、反向色譜

反向色譜用的填料常是以硅膠為基質㈠㈡㈢㈣㈤㈥㈦，表面鍵合有極性相對較弱官能團的鍵合相ⅲⅳⅴⅵⅶⅷⅸⅹⒶⒷⒸⒹ。

反向色譜所使用的流動相極性較強✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，通常為水ⓣⓤⓥⓦⓧⓨⓩ、緩沖液與甲醇☧☬☸✡♁✙♆。，、＇：∶；、乙腈等的混合物ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ。樣品流出色譜柱的順序是極性較強的組分最先被沖洗出⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，而極性較弱的組分在色譜柱上有更強的保留⒜⒝⒞⒟⒠⒡⒢⒣⒤。

常用的反向填料有C18⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺、C8❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰、C4等ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ。

三⒔⒕⒖⒗⒘⒙⒚⒛ⅠⅡⅢⅣⅤⅥⅦⅧⅨⅩⅪⅫⅰⅱ、無機填料

其它HPLC的無機填料色譜柱也已經商品化⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯，由于其特殊的性質ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，一般僅限于特殊的用途♀☿☼☀☁☂☄。

如石墨化碳黑正逐漸成為反向色譜柱填料❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣。這種填料的分離不同于硅膠基質烷基鍵合相ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，石墨化碳的表面即是保留的基礎ⓚⓛⓜⓝⓞⓟⓠⓡⓢ，不再需其它的表面改性❣❦❧♡۵。該柱填料一般比烷基鍵合相硅膠或多孔聚合物填料的保留能力更強⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓。

石墨化碳可用于分離某些幾何異構體❣❦❧♡۵，由于在HPLC流動相中不會被溶解✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅，這類柱可在任何PH與溫度下使用㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉。氧化鋁也可以用于HPLC❣❦❧♡۵。氧化鋁微粒剛性強㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，可制成穩定的色譜柱柱床⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺，其優點是可以在PH高達12的流動相中使用①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯。但由于氧化鋁與堿性化合物的作用也很強☈⊙☉℃℉❅，應用范圍受到一定限制❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰，所以未能廣泛應用♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃。

新型色譜氧化鋯基質填料也可用于HPLC☾☽❄☃。商品化的只有聚全物涂層的多孔氧化鋯微球色譜柱ⅲⅳⅴⅵⅶⅷⅸⅹⒶⒷⒸⒹ，應用PH1-14☈⊙☉℃℉❅，溫度可達100℃❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣。由于氧化鋯填料是最近幾年才開始研究㈧㈨㈩⑴⑵⑶⑷⑸⑹⑺⑻⑼⑽⑾⑿⒀⒁⒂，加之面臨的實驗難度⒜⒝⒞⒟⒠⒡⒢⒣⒤，其重要用途與優勢尚在進行之中♦☜☞☝✍☚☛☟✌✽✾✿❁❃。

目前⒜⒝⒞⒟⒠⒡⒢⒣⒤，商品化的色譜填料粒度從1um到超過30um均有銷售☧☬☸✡♁✙♆。，、＇：∶；，而目前分析分離主要用3和5um填料㈠㈡㈢㈣㈤㈥㈦。填料的粒度主要影響填充柱的兩個參數⒥⒦⒧⒨⒩⒪⒫⒬⒭⒮⒯⒰⒱⒲⒳⒴⒵❆❇❈❉❊†☨✞✝☥☦☓☩☯，即柱效和背壓✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴。

粒度越小ⓊⓋⓌⓍⓎⓏⓐⓑⓒⓓⓔⓕⓖⓗⓘⓙ，柱壓越大①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯，柱壓的增加限制了粒度小于3um的填料應用❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰。在相同選擇性條件下⒃⒄⒅⒆⒇⒈⒉⒊⒋⒌⒍⒎⒏⒐⒑⒒⒓，提高柱效可提高分離度㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，但不是唯一的因素ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ。

如果固定相選擇是正確❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣，但是分離度不夠⓱⓲⓳⓴⓵⓶⓷⓸⓹⓺⓻⓼⓽⓾，那么選擇用更小的粒度的填料是很有用的ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ。3um填料填充柱的柱效比相同條件下的5um填料的柱效提高近30%✤✥❋✦✧✩✰✪✫✬✭✮✯❂✡★✱✲✳✴；然而①②③④⑤⑥⑦⑧⑨⑩⑪⑫⑬⑭⑮⑯，3um的色譜柱的背壓卻是5um的2倍✵✶✷✸✹✺✻✼❄❅。

與此同時ⒺⒻⒼⒽⒾⒿⓀⓁⓂⓃⓄⓅⓆⓇⓈⓉ，柱效提高意味著在相同條件下可以選用更短的色譜柱✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，即相同的塔板數或分離能力✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，但是柱長更短✺ϟ☇♤♧♡♢♠♣♥，以縮短分析時間❋❀⚘☑✓✔√☐☒✗✘ㄨ✕✖✖⋆✢✣。

另外㊀㊁㊂㊃㊄㊅㊆㊇㊈㊉，可以彩用低粘度的溶劑做流動相或增加色譜柱的使用溫度❻❼❽❾❿⓫⓬⓭⓮⓯⓰，比如用乙腈代替甲醇⓱⓲⓳⓴⓵⓶⓷⓸⓹⓺⓻⓼⓽⓾，以降低色譜柱的壓力⑰⑱⑲⑳⓪⓿❶❷❸❹❺。

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